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更新時間:2013-04-15
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一、液相色谱儀檢測黄(huang)曲霉毒素實驗材料(liao):
1.1免疫親和柱:博納艾杰爾黄(huang)曲霉毒素总量免疫親(qin)和柱 订货號:HC09001
1.2色谱柱:Venusil MP C18 (4.6*150mm, 5μm),订货號:VA951505-0
二、液相色谱(pu)儀檢測(ce)黄曲霉毒素實驗方法:
1.1混合對照品溶液的製備 在分析黄曲霉(mei)毒素含量時,需(xu)要先製備浓度梯度明確的(de)標準對照溶液。精密量(liang)取黄曲霉毒素混合標準品溶(rong)液1mL,其中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的(de)標示(shi)浓度分別為1.0µg/mL、0.3µg/mL、1.0µg/mL、0.3µg/mL,將(jiang)其置(zhi)於10mL量瓶中,加入甲醇溶(rong)剂稀释至刻度線(xian)處,充分混匀(yun)后(hou)作為储備液。
1.2供(gong)試品溶(rong)液的製備 取供試品粉末約10g,精(jing)密(mi)称定,加入氯化钠2g,精密加入(ru)70%甲醇溶液(ye)100mL,進行超聲處理20分鐘以充分破壁並促進(jin)目(mu)標成分溶出,随后离心5分鐘(离心(xin)速度8000轉/分)進(jin)行固液分离,精密量取上清(qing)液10mL置於50mL量瓶中,用水(shui)稀(xi)释至刻度並摇匀,再精密(mi)量取25mL溶液通過免疫親和柱(zhu)進行色谱前處理(li)與雜質去除,控製流速每分鐘2-3mL以保證吸附效率,用水5mL進行首(shou)次淋洗並將洗(xi)液弃去,使空(kong)氣進入柱子排除残留(liu)水分,再用甲醇1.4mL分2次依次(ci)洗(xi)脱以完全收集目標成分,最后(hou)收集全(quan)部洗脱液,用(yong)水定容至2mL,即得所需供試品溶(rong)液。
1.3測定法 分別精密吸取上述混合(he)對照品溶(rong)液20µl、供(gong)試品溶液20µl,注入液相色谱儀,測定峰面积,从標準曲線上讀出供試品(pin)中相(xiang)当於黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的量,計算,即得。